实时荧光定量PCRqPCRvs常规聚合酶链反应cDNA区别与应用
引言
实时荧光定量PCR（qPCR）和常规聚合酶链反应（cDNA）的概念在现代分子生物学中扮演着至关重要的角色。两者都涉及到通过特定的酶促反应将一段DNA扩增，但它们在实验设计、操作步骤和应用领域有着显著的差异。
常规聚合酶链反应(cDNA)概述
cDNA是指由RNA模板进行逆转录得到的单链或双链DNA片段。它通常用于研究表达水平变化，特别是在基因表达分析中。这个过程包括几个关键步骤：首先，提取总RNA并选择性地去除其中的miRNA；其次，将剩余的mRNA进行逆转录，生成cDNA；最后，对cDNA进行标准PCR扩增，以获得足够多以供后续检测或其他实验使用。
实时荧光定量PCR(qPCR)概述
qPCR是一种高灵敏度、高精确度的技术，它能够快速准确地测定目标序列在样本中的复制数。这项技术利用荧光探针来监测每个循环中特定序列上产生的信号，从而确定原始物质数量。在整个过程中，不需要从开始到结束手动观察电泳图像，而是依赖于仪器自动化系统来记录数据，这极大地提高了工作效率。
qPCR与cDNAs比较
原理不同：
cDNA主要涉及到将RNA转换为可用于后续实验的手段，而qPCR则专注于对已存在的一组特定核苷酸序列进行扩增。
操作流程不同：
cDNA通常包含逆转录阶段，而q PCR不需要这一步，因为它直接作用于已知序列。
结果解读不同：
cDNAs结果可能反映出一个基因或一组基因在某个时间点或条件下的表达情况，而qPCRs结果则提供了这些基因相对于内参或者外参参考基因表达水平的一个比值。
应用场景比较
在医学研究方面，两者的应用场景也有所不同。例如，在疾病诊断中,qPCRs能够迅速准确地检测微量病毒、细菌等-pathogen-而且可以即时提供结果。而cDNAs则更多用于了解疾病发展中的关键信号通路以及药物治疗后的变化情况。
结论
总结来说,qPCRs和cDNAs虽然都是基于聚合酶链式反应原理，但各自解决的问题领域完全不同的。在实际工作中，我们可以根据实验目的选择最适用的方法。如果是急需快速检测少量目标分子的情况下，可以考虑采用高灵敏性的qPCRs。如果要深入了解某个基因家族在组织或细胞中的具体表现，则更倾向于使用传统但更加灵活和深入的手法——即通过获取全部信息然后再进一步分析—如常规聚合酶链反应(cDNAs)。
